PCR扩增仪的原理及扩增实验中存在的问题

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PCR检测方法有很多，其中PCR扩增仪又称为“PCR仪"，它是PCR实验中*的实验室设备之一。PCR仪器大致可以分为三类：即：普通PCR仪，荧光定量PCR仪，梯度PCR仪和原位PCR仪等。 

一、PCR的原理 

在pcr扩增实验中，PCR反应过程实质就是DNA按模板复制而发生的聚合酶链反应的过程，主要包括引物、dNTP、DNA靶序列、DNA聚合及PH缓冲液体系。

PCR反应过程如下：

1.通过升温反应体系混合物一般为：94℃/15s-30s.使目标DNA双螺旋的氢键产生断裂从而形成单链DNA作为合成模板.

2、在反应体系冷却至引物的TM值左右，使引物与单链DNA模板产生互补结合，从而实现DNA的互补扩增，这一过程也被称之为退火。

3、扩增延伸

在PCR扩增过程中，当反应体系的温度升高到72 ℃左右时，引物在TAQ聚合酶的作用下，以引物为起点dNTP作为底物合成新的DNA链条。

 以上步骤重复循环，直扩增量达到基因检测的所需要数量即可停止循环。

使用PCR扩增仪进行PCR反应过程中常见的问题：

无明显的扩增条带

这种情况主要是由于以下情况产生： 

（1）Taq酶失活或Taq酶活性加入量少所造成。DNA聚合Taq酶的保存温度一般在-20℃环境下，尽量避免反复冻融所产生的影响。

（2）混合模板反应体系中如果含有甲酸、甲醛含等杂质也会对DNA链上的碱基造成影响，降低PCR扩增效果。

（3）PCR仪的各反应阶段适宜温度设定也很重要，过高或过低的反应温度，都会使DNA聚合酶产生失活。

（4）引物设置不合理或反应系统中被蛋白酶及核酸酶，这些因素也同样会影响到DNA的合成与产出。

 （5）另外，PCR循环数不足或者延伸扩增时间短也会影响到PCR产物产量。

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