Lip 3000转染试剂与Lipofectamine2000的区别

Lipofectamine 3000简称LIP3000采用了脂质体纳米微粒技术，提供了出众的转染性能和可重复的结果。它适用于各种难以转染的细胞和常见的细胞，在保证转染效率的同时也提高了细胞存活率。 Lipofectamine 3000试剂可以将难转染细胞系的转染效率提升10倍左右，同时还可以降低细胞的死亡率。

   另外，LIP 3000还具有多功能性，在某些情况下，它甚至可以取代电穿孔，由于提升了转染后细胞的存活率，从而也简化了工作流程。尽管Lipofectamine 2000十分受欢迎，但对于某些敏感的细胞，依然存在细胞毒性。为此，在Lipofectamine 3000的开发过程中，科学家们优化了转染过程的四个步骤，并结合了先进的脂质体纳米微粒技术。所以，Lipofectamine 3000减少了试剂的用量，并降低潜在的毒性风险。

LIP3000和LIP2000的区别是什么？转染效率如何？

    通过科学家使用这两种试剂来转染来自各种组织的癌细胞。研究结果证实，Lipofectamine 3000试剂的转染性能高于lip2000。使用Lipofectamine 2000，只有25%的癌细胞系被认为是容易转染的（转染效率高于50%），而使用Lipofectamine 3000，这个比例高达60%。 

此外，Lipofectamine 3000还促进了新的技术，如当下流行的基因组编辑。GeneArt TALs和CRISPR靶定了HepG2和U2OS细胞中的AAVS1位点。采用新的转染试剂后，研究人员发现转染效率、平均荧光强度和基因组切割改善。这些进步可实现更轻松的干细胞操作，增强转基因的位点特异性插入。

什么是脂质体？ 
　脂质体脂质体是类似于细胞膜的具有高亲和力的囊泡，将DNA放入其中（准确地说，DNA包裹在脂质体中）并导入细胞。大多数脂质体是脂质和亚精胺衍生物结合的类型。我尝试了 Lipofectamin、Lipofectamin2000、Lip3000、Tlansfectine、Tlansfectum、DMRIEC、SuparFect、Fugen6、Tf-x、Do-fecto，将 Lipofectamin 与试剂结合使用。现在可以转染大多数贴壁细胞系。

脂质体的制备和转染过程：
 待转染的细胞应在前一天接种。具体转染步骤如下： 
1. 1. 向 Opti-MEM50ul 中加入 DNA 溶液（1ug；即使在引入多个质粒时也总共 1ug）并混合。
2. 2. 将 Plus Regent (4ul) 添加到 opti-MEM50ul 中并与 1 混合。静置15分钟。在此期间，将细胞更换为无血清培养基（不包括抗生素）。
3. 3. 将 Lipofectoamine (2ul) 添加到 opti-MEM100ul 中并与 2 混合。静置15分钟。用显微镜强烈放大时可以观察到细颗粒。
4. 用新的 600 ul 无血清培养基更换细胞培养基。3. 3. 添加脂质体并缓慢混合。
5. 2-4 小时后（2 小时即可）加入 800 ul 20% 血清培养基。
6. 再过 2-4 小时后，用 10% 血清培养基（不含抗生素）更换培养基。
（换液隔天重新电镀） 
细胞转染时的注意事项： 
 尽量使用聚苯乙烯设备（48孔板方便）。DNA 在小量制备水平上的纯化程度较低。将其与 maxi 一起使用并与 CsCl 结合，或通过用苯酚/氯仿提取 minipresed DNA 并用 EtOH 沉淀来使用它。

2. 或者，如果在步骤 3 中形成了大的团块，那是由于 DNA 纯化程度低。如果在转染后的第二天观察到真菌污染，则主要认为是从质粒 DNA 或其管中携带的。更换10%血清培养基（不含抗生素）后，细胞在4小时左右即可恢复，因此可通过更换10%血清培养基（含抗生素）来防止污染。 

3. 通常在转染后24 至 72 小时观察到转基因的表达。
 4.正常情况下峰值为48小时，但当细胞瞬时表达且细胞增殖能力高时，表达水平会相对低于24小时。在报告基因检测中，转染后的第二天，需要将48孔板稀释1/3至2/3倍并重新铺展，贴壁培养。正常的核受体配体反应在大约 8 到 12 小时内诱导报告产物。

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