常用化学消毒剂对诺卡菌属的消毒效果实验对比

实验目的：通过常用化学消毒剂对诺卡菌属的消毒效果，为诺卡菌属的消毒策略提供依据。
实验方法： 以鼻疽诺卡菌为指示菌，分别选取高效消毒剂（含氯类）、中效消毒剂（醇类）、中低效消毒剂（季铵盐类）进行载体浸泡定量杀菌试验，并以染有定量鼻疽诺卡菌的不锈钢台面为对象进行物体表面消毒模拟现场试验。结果 载体浸泡定量杀菌试验结果表明，60%乙醇作用2min、有效氯500mg/L 含氯消毒剂作用 5min、1000mg/L季铵盐作用10min均可杀灭鼻疽诺卡菌物体表面消毒模拟现场试验中，75%乙醇作用5min，有效氯1000mg/L含氯消毒剂作用 10 min 均对鼻疽诺卡菌杀灭效果，而1900mg/L季铵盐作用20min仍未能杀灭鼻疽诺卡菌。
实验结论 ：针对诺卡菌属选用常用化学消毒剂时，可初选醇类和含氯消毒剂；若选用季铵盐类消毒剂，则需较高的浓度和较长的作用时间。
具体实验步骤： 
1. 菌悬液的制备
参照2002年版《消毒技术规范》的方法，取鼻疽诺卡菌48 h新鲜培养物，用胰蛋白胨生理盐水溶液(TPS)洗脱，加入有机干扰物牛血清白蛋白，菌悬液浓度为2.5×10⁷～2.5×10⁸ cfu/mL
2. 消毒剂选择及配制
在实验室常用消毒剂中，分别选取高效消毒剂(84消毒液)、中效消毒剂。(75%乙醇)和中低效消毒剂(双癸基二甲基溴化铵)。用无菌标准硬水配制成使用浓度。
3.中和剂鉴定试验
中和剂为D/E中和肉汤主要中和成分为0.1%硫乙醇酸钠、0.6%硫代硫酸钠、0.25%亚硫酸氢钠、0.7%卵磷脂和0.5%吐温80。按2002年版《消毒技术规范》)对上述消毒剂进行中和剂鉴定试验。
4.载体浸泡定量杀菌试验
以不锈钢圆片为载体，对鼻疽诺卡菌进行载体浸泡定量杀菌试验。
5.对比实验：
根据各类消毒剂的特性分别设定3组作用时间，以该消毒剂的常用浓度为起始浓度，若全杀灭则降低浓度继续试验，直至达到该消毒剂的min使用浓度，对照组回收菌量为5×10⁵~5×10⁶cfu/片，杀灭对数值≥3.00判定为消毒合格。
6.物体表面消毒模拟现场试验
统一使用 500 mL喷壶，以染有定量鼻疽诺卡菌的不锈钢试验台面为对象，用各消毒剂的常用浓度进行定量喷洒消毒。对照组回收菌量为5×10⁵~5×10⁶cfu/cm2,杀灭对数值≥3.00判定为消毒合格。
7.载体浸泡定量杀菌试验结果
 3组消毒剂以常用浓度75%乙醇作用1 min、有效氯1000 mg/L含氯消毒剂作用2 min、1900 mg/L 季铵盐作用5 min均能杀灭鼻疽诺卡菌(表1)。3组消毒剂降低浓度，60%乙醇作用2 min、有效氯500 mg/L含氯消毒剂作用5 min、1000 mg/L,季铵盐作用10 min均可杀灭鼻疽诺卡菌。

8.物体表面消毒模拟现场试验结果
3组消毒剂以常用浓度作用，即75%乙醇作用5 min、1000 mg/L有效氯作用5 min可全杀灭诺卡菌；而1900 mg/L季铵盐作用20 min仍未杀灭诺卡菌，但杀灭对数值达到4.45,可判为消毒合格(表3)。

常用化学消毒剂消毒机理：
诺卡菌属细胞壁的结构组成与革兰阳性菌相似，其主要成分为肽聚糖，N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁借助β-1，4糖苷键连接成链状结构，再由胞壁酸上的短肽侧链进一步交联成为立体网格分子，增强细胞壁的保护效果 ，防止多种杀菌药液渗入，理论上会导致对化学消毒剂的抵抗力较强，消毒难度增大。
乙醇广泛用于皮肤黏膜以及医疗器械和精密仪器表面消毒，消毒机制是对微生物的脱水作用，以及蛋白质变性、凝固，破坏细胞壁和细胞膜的结构功能，同时能够破坏微生物酶系统，阻碍其正常代谢83。对于放线菌来说，主要消毒方法的报道是土壤中物理 或农药的杀灭试验，关于乙醇对其消毒效果的观察未见报道。本研究发现，载体浸泡定量杀菌试验中，75%的乙醇作用1 min对诺卡菌属具有较好杀灭效果浸泡60%的乙醇消毒剂杀灭诺卡菌属也仅需作用2min。这说明较低浓度的乙醇仍然能有效杀灭诺卡菌属，或对乙醇为主要杀菌成分或复配成分的消毒剂生产有指导意义。
含氯消毒剂溶于水能产生次氯酸，破坏微生物细胞壁，继而进入细胞内，氧化破坏细胞成分，使其代谢失调、停止。在酸性环境中含氯消毒剂溶解过程能产生更多的次氯酸，从而使其杀菌能力增强。同时，氯能与细胞中代谢相关的酶形成氮-氧化合物，使细胞产生代谢障碍而死亡。有研究发现，使用500mg/L 含氯消毒剂擦拭重症医学科物体表面，对多种耐药菌和耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌有杀灭效果。
载体浸泡定量杀菌试验结果显示，500mg/L有效氯作用2、5、10min对鼻疽诺卡菌均有杀灭效果物体表面消毒模拟现场试验中，有效氯500mg/L含氯消毒剂作用5min、有效氯1000mg/L含氯消毒剂作用2min 即有杀灭效果，提示随消毒剂内有效氯浓度增加和作用时间延长，杀灭效果也随之提高。
季铵盐类化合物是一类阳离子表面活性剂，包括单链季铵盐和双链季铵盐，其杀菌作用机制主要是带正电荷的阳离子通过异性电荷的吸引作用，在菌体表面浓集，再渗透扩散穿透细胞壁使其被破坏，经过被破坏的细胞膜人侵到细胞内部，使蛋白质变性沉淀，酶活性受到损害，加速细菌调亡季铵盐是近些年在消毒领域应用广泛的新型消毒剂，对细菌、真菌和亲脂病毒均有良好的杀灭效果。
季铵盐载体消毒湿巾对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、泛耐药鲍曼不动杆菌及泛耐药铜绿假单胞菌均有较好的杀灭效果。
另外，季铵盐类消毒剂有一定持效杀菌作用，单链季铵盐、复合季铵盐和固化季铵盐，其杀菌持效性依次增强；同样，双链季铵盐消毒剂在较低浓度下（850mg/L）对表面喷雾后存放4h后，对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌仍具有良好的持效杀灭作用；
双链季铵盐消毒液（含量0.3%±0.03%）对ICU物品表面的消毒适宜间隔时间为8h，研究结果表明季铵盐具有持效杀菌作用。
  在该实验中，载体定量杀菌浓度1000 mg/L季铵盐，作用10min可全杀灭诺卡菌；物体表面消毒模拟现场试验中，1900mg/L季铵盐才能达到杀灭效果，说明日常消毒过程中可使用较高浓度的季铵盐并延长作用时间。

来源：苏州阿尔法生物实验器材有限公司