免疫荧光技术简介

概述：

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位。

目的：

测定内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。

步骤：

1、细胞准备；

2、固定。根据需要选择适当的固定剂固定细胞，固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月；

3、通透。使用交联剂（如多聚甲醛）固定后的细胞，一般需要在加入抗体孵育前，对细胞进行通透处理，以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。

4、封闭。使用封闭液对细胞进行封闭。

5、一抗结合。室温孵育1h或者4℃过夜。

6、二抗结合。间接免疫荧光需要使用二抗。

7、封片，荧光显微镜检查

免疫荧光技术用到的实验室仪器和设备：

免疫荧光技术是一种结合了免疫化学和荧光标记技术的方法，用于在细胞或组织样本中检测特定的抗原或抗体。进行免疫荧光实验通常需要以下实验室仪器和设备：

荧光显微镜：用于观察和拍摄荧光标记的样本。

载玻片和盖玻片：用于制作样本切片。

显微镜玻片加热器：用于固定样本。

孵育箱：用于在特定温度下孵育样本和试剂。

离心机：用于离心样本，如分离细胞或去除多余抗体。

移液器：用于准确量取和转移液体。

吸头：与移液器配合使用，用于吸取和分配液体。

洗板机：用于自动化洗涤步骤，减少交叉污染。

湿盒：用于在暗环境中孵育样本。

显微镜载物台加热器：用于维持样本温度，尤其是在观察活细胞时。

激光扫描共聚焦显微镜（可选）：用于更高级的荧光成像。

pH计：用于调整和监测溶液的pH值。

去离子水系统：用于制备高纯度的去离子水。

滤光片：用于选择特定波长的光。

荧光染料：用于标记抗体或抗原。

抗体和抗原储存设备：如冰箱和-80°C超低温冰箱。

生物安全柜：用于在无菌条件下操作样本。

热封膜机：用于封膜显微镜玻片。

洗涤瓶和容器：用于存储和洗涤试剂及样本。

显微镜摄像头：用于捕捉显微镜下的图像。

图像分析软件：用于分析显微镜拍摄的图像。