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Transwell實驗的步驟

本文主要介紹4種Transwell實驗的實驗步驟，具體包括：Transwell腫瘤細胞遷移實驗、Transwell上皮細胞培養(yǎng)實驗、TranswellB16細胞的體外遷移實驗、Transwell內(nèi)皮細胞HMEC-1遷移實驗。一、Transwell腫瘤細胞遷移實驗過程與Transwell侵襲實驗基本一致，不同的只是不需要鋪Matrigel。由于沒有基質膠的阻擋，細胞穿過膜的速度較侵襲實驗明顯加快，所以細胞量要更大。我做侵襲實驗的細胞密度是1×10°，而遷移實驗的密度是1×10°...

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重組蛋白表達技術要點

大腸桿菌（E.coli）表達重組蛋白的技術經(jīng)過多年的發(fā)展，已經(jīng)成為一個非常成熟表達系統(tǒng)。為了在大腸桿菌表達體系中獲得可溶以高表達產(chǎn)量的蛋白，一個優(yōu)秀的表達策略是重要的。為了高效表達有活性蛋白，一般需考慮以下幾個因素：1.宿主體系的選擇細菌、酵母、哺乳動物細胞、絲狀真菌和單細胞藻類均可以作為表達宿主，每一種表達宿主都有各自的優(yōu)缺點。如果需要表達的蛋白具有真核的翻譯后修飾（糖基化修飾），那么可以選擇酵母、哺乳動物細胞等，而大腸桿菌等原核表達體系則不適用。大腸桿菌作為表達外源蛋白廣...

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凝膠電泳的染色方法

凝膠電泳是研究蛋白質性質的一種相對簡單、快速和高靈敏度的工具。它是分析化學、生物化學和分子生物學的主要工具。通過電泳分離蛋白質是基于這樣一個事實，即帶電分子將在施加電場時通過基質遷移。蛋白質電泳分離的基質是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化學試劑是單體丙烯酰胺和N，N'-雙丙烯酰胺（雙-丙烯酰胺）。聚合丙烯酰胺和雙丙烯酰的方法是使用TEMED（四*基乙二胺）和過硫酸銨。聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)部的聚合形成了一個交聯(lián)的微孔網(wǎng)絡。這種孔隙網(wǎng)絡允許小蛋白質分子快速通過，同時減緩較大蛋白質的...

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Vero細胞無血清懸浮培養(yǎng)技術驗證

大多數(shù)用于抗體生產(chǎn)的細胞主要基于動物細胞上的開發(fā)，如MRC-5人二倍體細胞、Vero猿猴腎上皮細胞、Madin-Darby犬腎(MDCK)細胞和雞胚成纖維細胞。尤其是來自非洲綠猴腎臟的Vero細胞已被廣泛用于vaccine生產(chǎn)，因為它們被WHO機構證明沒有致癌潛力。許多vaccine，例如針對基孔肯雅熱、登革熱、日本腦炎、病毒性胃腸炎、脊髓灰質炎、狂犬病、羅斯河熱、嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥、天花、西尼羅河腦炎和流感的vaccine都是使用Vero細胞培養(yǎng)系統(tǒng)開發(fā)的。用于viru...

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一文了解細菌內(nèi)毒素

內(nèi)毒素(Endotoxin)是一種脂多糖(LPS)，來源于革蘭氏陰性細菌外膜，其細胞壁外膜的外部脂質成分由內(nèi)毒素分子組成，細胞死亡或分解后被釋放出來。LPS具有三個結構，由菌體特異性多糖、非特異性核心多糖和脂質A三部分構成。內(nèi)毒素單體分子量為10kDa左右，在不同成分水溶液中，可形成大分子聚集體，大的可超過1000kDa。類脂A是內(nèi)毒素多種生物活性或毒性反應的主要基團。該基團沒有種屬特異性,所以各屬細菌的類脂A結構相似,其毒性反應相似，如發(fā)熱、血液流動力學改變、彌漫性血管內(nèi)凝...

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